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1.&苍产蝉辫;准备工作液：

1）工作液D：取1份PF00011-A（Foxp3 / 转录因子固定/破膜浓缩液 4X）和3份PF00011-B（Foxp3 / 转录因子固定/破膜稀释液 1X）进行混合，混匀后备用。

2）工作液F：取1份PF00011-C（流式细胞术破膜缓冲液 10X）和9份超纯水混匀后，制备成流式细胞术破膜缓冲液（1X）备用。

2.&苍产蝉辫;按照笔谤辞迟别颈苍迟别肠丑的细胞表面流式细胞术的实验步骤中说明进行细胞表面染色。（如不需要进行细胞表面染色，略过此步骤。）

3. （表面染色后，洗涤，弃上清）每1 x 10^6/cells的EP管中加入1 mL工作液D，缓慢吹打以确保细胞重悬。在室温下避光孵育45分钟。

4. 在室温下以 400-600g 离心5分钟，弃上清，向EP管中加入2 mL工作液F，缓慢吹打以确保细胞重悬，400-600g 离心5分钟，弃上清。

5. 将细胞沉淀重悬于 100 uL 工作液F中，静置10-15min。

6. 使用抗体推荐用量 如5 uL/Test（或使用工作液F对流式抗体进行预稀释），避光孵育抗体-细胞混合物30-45min，用于检测细胞内抗原。

7. 孵育完毕后，每管中加入2 mL工作液F。

8. 在室温下以400-600g离心试管 5 分钟，然后弃上清。

9. 每管中加入2 mL工作液F。

10. 在室温下以400-600g离心试管 5 分钟，然后弃上清。

11. 将细胞沉淀重悬于加入0.2 mL工作液F中。

12.&苍产蝉辫;在流式细胞仪上采集样品。